免疫细胞无血清培养基(CIK)

简要描述:
乐山生物免疫细胞无血清培养基(CIK),用于单核细胞向CIK细胞的体外诱导及体外大规模扩增培养。

产品描述

免疫细胞无血清培养基(CIK)

【免疫细胞无血清培养基(CIK)   用途与描述 】

免疫细胞无血清培养基,可培养新鲜采集的外周血样本,也可培养浓缩白细胞样本以及冻存的单个核细胞。
可用于脐带血样本的培养。

【免疫细胞无血清培养基(CIK)    规格与保存 】


产品名称


产品货号


数量与规格


CIK培养套装(外周血+2L体系)


NC0101 + AN0101.2


1000mL*2+2L试剂盒


CIK培养套装(外周血+3L体系)


NC0101 + AN0101.3


1000mL*3+3L试剂盒


CIK培养套装(脐带血+2L体系)


NC0101 + AN0104.2


1000mL*2+2L试剂盒


CIK培养套装(脐带血+3L体系)


NC0101 + AN0104.3


1000mL*3+3L试剂盒

2L培养体系免疫细胞无血清培养基套装:适用于50mL外周血的样本量,使用2L培养基。

产品名称

描述

规格

保存条件

保存期限

免疫细胞无血清培养基(CIK)

免疫细胞体外培养

1000mL/瓶*2

2-8℃保存

12个月

CIK细胞诱导因子试剂盒

YC001起始培养时添加

1支

-20℃保存

YC002接种24h后添加

1支

YC003接种24h后添加

1支

YC004接种24h后添加

1支

YC005添加至培养基中使用,1支/L

2支

3L培养体系免疫细胞无血清培养基套装:适用于100mL外周血的样本量,使用3L培养基。

产品名称

描述

规格

保存条件

保存期限

免疫细胞无血清培养基(CIK)

免疫细胞体外培养

1000mL/瓶*3

2-8℃保存

12个月

CIK细胞诱导因子试剂盒

YC001起始培养时添加

1支

-20℃保存

YC002接种24h后添加

1支

YC003接种24h后添加

1支

YC004接种24h后添加

1支

YC005添加至培养基中使用,1支/L

3支

【免疫细胞无血清培养基(CIK)  使用方法】

1、采集与分离外周血
采集外周血,Ficoll密度梯度离心分离收集单个核细胞。

2、单个核细胞的接种与诱导活化
1) 0d时,绷胞计数。按细胞密度2x106cell/mL接种至对应体积的培养液中。
    添加诱导因子YC001一支。添加10%比例的自体血浆。
2) ld时(24小时),添加诱导因子YC002、YC003、YC004至已经接种细胞的培养液中。
    将YC005添加至未经使用的培养基中,待用。

3、细胞的连续培养与扩增
1) 3d时,补入新鲜培养液,调整细胞密度至(0.6-0.8)x106cell/mL。同时添加新加入培养液体积l0%比例的自体血浆。补液比例大致
    在1:2左右(原有培养液体积:新加培养液体积)
2) 5d时,补入新鲜培养液,调整细胞密度至【0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致在1:3左右。
3) 7d时,补入新鲜培养液,调整细胞密度至(06-08)x106cell/mL。补液比例大致在1:2左右。
4) 9d时,将剩余培养液全部加入。

4、收获细胞
培养周期结束后,依据细胞量收获细胞。

【供参考的补液程序范围】

2L培养体系补液体积示意表:50mL外周血,接种密度2.0x106 cell/mL。

天数

操作方式

原有培养液
体积/mL

新加培养液
体积/mL

培养液
总体积/mL

血浆添加
/mL

因子添加

备注

0d

接种

0

25

25

2.5

YC001

T75瓶

1d

诱导





YC002
YC003/YC004


3d

补液

25

50

75

5


换瓶
T175瓶

5d

补液

75

225

300



转培养袋,
平分两袋

7d

补液

300

700

1000



每袋补350mL

9d

补液

1000

1000

2000



每袋补500mL

备注:
1)补液后最优密度区间为(0.6-0.8)x106cell/mL。若按体积补液与最优密度区间有冲突的话,请以最优密度区间为准。
2)纯粹按固定体积接种与补液并非不可,但应建立在丰富的样本量基础之上。
3)外周血量少于50mL,应使用的补液程序,请联系本公司免费索取。 

3L培养体系补液体积示意表:100mL外周血,接种密度2.0x106 cell/mL。

天数

操作方式

原有培养液
体积/mL

新加培养液
体积/mL

培养液
总体积/mL

血浆添加
/mL

因子添加

备注

0d

接种

0

50

50

5

YC001

T175瓶

1d

诱导





YC002
YC003/YC004


3d

补液

50

100

150

10



5d

补液

150

450

600



转培养袋,
平分两袋

7d

补液

600

1400

2000



每袋补700mL

9d

补液

2000

1000

3000



每袋补500mL

备注:
1)补液后最优密度区间为(0.6-0.8)x106cell/mL。若按体积补液与最优密度区问有冲突的话,请以最优密度区间为准。
2)纯粹按固定体积接种与补液并非不可,但应建立在丰富的样本量基础之上。
3)外周血量少于100mL,应使用的补液程序,请联系本公司免费索取。

【免疫细胞无血清培养基(CIK)   产品性能之外周血样本

1. 细胞总数:125亿,折合62.5亿/L。

免疫细胞无血清培养基培养的细胞的数量增长曲线.jpg

2、CD3+CD56+阳性率在25%-55%

免疫细胞无血清培养基培养的细胞的流式检测数据.jpg

3. 细胞支持密度更高。
培养14天后,细胞密度可至5.7×106cell/mL。 培养15天后,细胞密度可至6.2×106cell/mL。

免疫细胞无血清培养基培养的细胞的密度.jpg

4. 培养后期补液结束后,细胞维持能力更强。
最后一次补液(9d),持续至17天,细胞数量一直维持增长,未见明显下降。

免疫细胞无血清培养基培养的细胞的维持能力.jpg

【免疫细胞无血清培养基(CIK)   产品性能之脐带血样本

50mL脐带血

免疫细胞无血清培养基补液程序-脐带血.jpg

细胞生长曲线

CIK细胞生长曲线—脐带血.jpg

CIK细胞阳性率

CIK CD3.jpg     CIK  CD56.jpg     CIK  CD3+CD56+.jpg

客户问答

1、你们推荐的接种密度为2.0,1.0密度接种不可以吗?

答:2.0的接种密度,为特别优化的接种密度。此接种密度下,能够更好的发挥出此培养基的特点,即前期生长速度快,后期维持能力强,能够支持高密度细胞生长。细胞更“好养”。
2.0的接种密度较1.0的接种密度,也可将诱导因子的使用量降低50%,从而降低了用户的使用成本。
1.0密度接种也是可以的,只是前期细胞生长速度较2.0接种缓慢。按密度补液的规则同样适用。
需要特别说明的是,不是所有培养基均可支持高密度接种与高密度培养的。一般认为,只有营养更丰富的无血清细胞培养基可以支持高密度接种,而低血清培养基只能支持低密度接种。

2、我现在已有现成的培养程序,非得按照你们的程序去做吗?

答:更改培养程序从来不是一个简单的事情,但确实不存在一个适用所有品牌培养基的培养程序。
至于是否需要更换或调整培养程序,视情况而定:
a)如果您现在使用的是Lonz*、Gibc*等无血清培养基,您可完全套用现有的培养程序。
b)如果您现在使用的是55*产品,您现有的培养程序极大可能不适用。
有一个简单的方法去判断您现有的程序是否可以不加调整的应用到本产品上,如果您现在每次补液后的密度区间在0.5-1.0之间,那您的程序不需做调整,可以直接使用。
乐山免疫无血清细胞培养基(CIK)在40-50mL外周血,14d-15d培养周期,2L培养基使用量。最终能获得的细胞数范围在80亿-120亿之间。如果您现有的程序难以到达此区间。建议尝试我们建议的培养程序。

3、如果用一句话来概括你们的培养程序,是什么?

答:2.0、早转袋、9d。
2.0:是指接种密度2.0
早转袋:是指如果有可能,尽早的将细胞转至培养袋中培养。培养袋中的氧气的含量要远远高于培养瓶中。能够更好的发挥该培养基支持高密度培养的特性。
我公司大量的实验数据表明,相同情况下,培养袋中的细胞数量比培养瓶中的多30%左右。
9d:是指9d (9x24小时)时,将全部的培养液全部加入,一直至14d,甚至18d均不需补液。
由于该培养液具有极好的后期维持能力,通过减少1次补液,不仅减少了操作,也降低了污染的风险。

4、你们程序最后一次补液是9d,我最迟18d才会使用细胞,不会发生细胞数量下降情况吗?

答:不会。我们公司大量的实验数据能够支撑:最后一次补液后,延至10日后,期间细胞数量不会显著下降。

使用说明

暂无使用说明下载

背景知识

2016年3月1日,免疫细胞无血清培养基-2016版产品正式上市。

与2015版产品相比,免疫细胞无血清培养基-2016版产品在产品容错性、程序适应能力、细胞维持能力、最大支持密度等4个方面均有了显著的提升。

根据乐山生物的产品研发规则,已经上市的产品,在市场销售时间段内,均需进行持续更新。产品更新的依据主要在于客户反馈回来的使用信息与我方研发人员在产品极端情况下测试新发现的问题。一般说来,上市3年以内的产品,每年(12个月)进行一次产品更新。3年以后的产品,每24月进行一次更新。改进完成的免疫细胞(CIK细胞)无血清培养基产品,已与2016年3月1日上市销售。取代了原有的2015版产品。

2016款产品,相比2015款产品,在如下4个方面有了显著性提升:
第一, 产品容错性。
CIK细胞无血清培养基产品,其用途现在主要是生产用途。与实验室使用不同,生产环境下使用有着截然不同的特点:比如,按时间间隔补液不管由于样本原因导致的细胞密度的差异;比如,由于跨周末导致的超长时间的补液间隔(72小时);比如,样本量大导致的样本与血浆处理难以整齐划一等。这些问题,以往只能靠提供使用人的操作步骤来解决。更新后的产品,主要是调整了产品的容错性,做到了在上述状况下,也可得到一个大致满意的结果。简化了操作步骤,降低了对人员技能的要求。

第二, 程序适应能力
坦率的说,不同的CIK细胞无血清培养基,有其最适合的培养程序,包括接种密度、因子添加种类与数量、补液数量与间隔等。但由于生产培训与生产SOP原因,去更改原有操作SOP总是很困难的。改进后的2016版产品当然也有她最适合的培养程序,但同时也做到了在其他培养程序下也能得到一个大致满意的结果。

第三, 细胞维持能力
一般由于成本等方面的考虑,在培养的后期12d以后,一般就很少再添加培养基了。因此,保证在不添加培养液的96小时内,细胞数不下降就很重要的。改进后的2016版产品满足了这个要求。

第四, 最大支持密度
CIK细胞体外大规模扩增,有着“两高”的要求,更高的细胞数、更高的阳性率。改进后的2016版产品在静态培养情况下,最高支持密度可达到7.0×106cell/ml。

 

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