重组胰酶|基因重组胰蛋白酶

简要描述:
基因重组胰蛋白酶,由重组大肠杆菌表达生产,无动物源组分;2-8℃即可稳定保存,无需分装冷冻。 重组胰蛋白酶用于贴壁细胞的消化及严禁接触动物源组分的生物制药、生物治疗等相关领域。

产品描述

重组胰酶|基因重组胰蛋白酶

【重组胰酶|基因重组胰蛋白酶  用途与描述】

细胞培养方面:
1、原代细胞的获取,用于组织块的消化解离
2、用于贴壁细胞的传代消化
3、用于微载体方法培养的细胞消化
4、用于严禁接触动物源的生物制药等领域

分子领域:
1、用于特异性的蛋白质酶解
2、蛋白测序、蛋白组学研究
3、制作肽谱图
4、PAGE胶上的肽段的胰酶消化

重组胰酶|胰蛋白酶是一种丝蛋白酶,主要切割精氨酸和赖氨酸羧基端肽键,通过特定位置上降解细胞间结合处蛋白,
细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用而成为球形,从而使细胞分开。

本产品使用最新技术基因重组的胰蛋白酶,利用DNA技术在大肠杆菌中表达,纯度更高,稳定性更强。

【重组胰酶|基因重组胰蛋白酶   规格与保存】

产品货号
产品名称
产品规格
保存条件
有限期限
NC1002重组胰酶|基因重组胰蛋白酶100mL/瓶2-8℃保存12个月

【重组胰酶|基因重组胰蛋白酶   主要成份】

重组胰酶|基因重组胰蛋白酶的主要成份:重组胰蛋白酶、无钙镁离子的缓冲盐溶液

【重组胰酶|基因重组胰蛋白酶   使用方法】

1、细胞消化前准备(以T25瓶为例)

a)观察贴壁细胞长满整个培养瓶视野80%以上,弃去细胞培养液。
b)用5mL无钙镁的HBSS溶液或PBS清洗贴壁细胞,弃去清洗液,重复2步骤2次。

2、细胞消化中(以T25瓶为例)

a)向T25瓶中加入1ml重组胰蛋白酶液,置于37度培养箱消化细胞。
b)当细胞变圆时,加入5ml含血清的培养基或含胰酶抑制剂的无血清培养基终止消化。

3、细胞消化后传代 (以T25瓶为例)

a)将消化下来的细胞离心去除上清液(去除未中和掉的胰酶)。
b)根据细胞传代比例,加入相应的培养基,如1:3传代则加入20ml培养基,吹打混匀后分4瓶继续培养。
     

【重组胰酶|基因重组胰蛋白酶  消化能力】

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对于难消化的细胞,有两种消化方法——常规消化法和预消化法。 
我们推荐使用预消化方法消化。以 MDCK为例,常规消化需要13-15min,预消化需要10-13min。 

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客户问答

1、基因重组胰酶和0.25%EDTA-胰酶一样吗?

2、第一次使用重组胰酶,按传统方法进行保存了?并且反复冻融,对活性有影响吗?

答:严格按说明书要求2-8℃保存,避免反复冻融,重组胰酶经过极限测试反复冻融十次活性无明显变化,相比传统胰酶更为稳定,如误操冷冻后溶解可继续使用。

3、重组胰酶消化特点与传统胰酶一致吗?有什么特殊或需要注意的地方?

答:重组胰酶消化要比传统胰酶较快速,故大部分细胞消化时间会有所提前,需要避免消化过度,其它步骤与传统胰酶无差别 。

4、无血清培养基和含血清培养基培养的细胞用重组胰酶消化有什么需要注意的?

答:无论在无血清培养基体系内,还是在有血清培养基体系内培养的细胞,消化前均需要用无钙镁离子缓冲液冲洗细胞,保证消化的效果。

5、对于难消化的细胞如何提高消化效率?

答:如MDCK 一般消化时间在13-15min,可以采用先预消化1min,弃去消化液,再加入新鲜消化液继续消化,时间可缩短3-5min。

6、既然重组胰酶纯度高,活性强 ,是不是消化时可以减少用量?

答:消化时间在3min以内的细胞,可减少用量 (如T25瓶 传统用1ml,重组可用500ul) 

7、能简述一下传统胰酶和重组胰酶的来源吗?以前只知道传统胰酶,不了解重组胰酶。

答:传统胰酶取自猪、牛或羊的胰脏。胰脏中除了胰蛋白酶,还有其他蛋白酶。而生产工艺的特点决定了产品不可避免的会有其他杂质。
基因重组胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,产品不含任何动物来源组分,也由于重组蛋白生产的产物单一性特点,产物中除了胰蛋
白酶外,没有传统天然胰酶中不可避免的糜蛋白酶等组分。纯度更高、杂质更少,批次更稳定。

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传统胰酶液相色谱图中杂峰越多,纯度越低。(HPLC图中峰越多,意味组分越多)

传统胰酶可见四种含量较高的成分,同时由于其中一种杂质含量较高,无法分开,出现降解,稳定性差。

 

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                                                  基因重组胰酶液相色谱图中几乎无杂质,纯度高

                                                   基因重组胰酶峰型好,稳定性好,无降解峰。


8、平常用的是0.25%EDTA-胰酶,都是需要在-20℃下保存,为什么重组胰酶可以在2-8℃保存?

答:大肠杆菌表达的重组蛋白,通过采用重组胰蛋白酶的甲基化修饰工艺(已经申报发明专利),提高了胰蛋白酶的温度稳定性,做到了2-8℃的稳定保存。真正做到了即取即用,不需等待。

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通过分光光度计测量在不同保存温度、不同保存时间下对应胰蛋白酶活力的反应底物,计算出胰蛋白酶的活性:

1.  产品加速实验中,4℃、25℃温度环境下,基因重组胰酶活性稳定。

2.  30℃环境下,基因重组胰酶活性稍有下降。

3.  40℃环境下,呈现出基因重组胰酶半衰时间。说明此温度环境下,试剂开始讲解,已经出现产品不稳定状态。

4.  50℃环境下,基因重组胰酶活性下降更为明显。

5.  60℃以后基本20min内可以使胰蛋白酶失活。

使用说明

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背景知识

2016年8月1日,乐山生物的基因重组胰蛋白酶产品正式上市。该产品应用最新基因工程技术,利用大肠杆菌表达出猪胰蛋白酶蛋白。该胰酶产品无任何动物源组分。生产工艺中的蛋白产物甲基化修饰的非专利保密技术,将原来只能保存在-20度环境中的天然胰酶,改造成了能够在2-8度环境下稳定保存。此产品的推出,将乐山生物推入了一直为国外生物巨头把持的非冷冻重组胰蛋白酶的广阔市场。

该胰蛋白酶除了可以满足传统猪胰酶产品的消化贴壁细胞的功能以外,还可应用到传统胰酶产品无法应用的临床应用相关领域,比如生物制药领域与细胞治疗领域。在这些领域中,由于生产的重组蛋白或干细胞要回输人体,因此法规规定严厉禁止应用任何含动物源组分的产品。而基因重组胰蛋白酶由于是大肠杆菌表达的重组蛋白,无任何动物源组分,因此,在上述领域有着极为广阔的应用。

 

胰蛋白酶(Trypsin)是一种丝氨酸蛋白水解酶。其前体为无生物活性的胰蛋白酶原(trypsinogen),产生于胰脏。随胰液分泌到小肠中,被小肠中的肠肽酶激活后,能将蛋白质分解为多肽,进而分解成为氨基酸。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端。正是因为胰蛋白酶的这个特性,因此,在体外细胞培养中,胰蛋白酶被用于消化贴壁细胞以获得相互分离的单个细胞。

传统使用的胰蛋白酶,取自牛、猪或羊的胰脏,经后期的纯化结晶而得。动物来源与生产工艺先天决定了传统胰蛋白酶有较高的外源病毒污染与杂酶污染的可能性,无法应用于生物制药与细胞治疗等临床领域。

 

基因重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产,氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。酶切特异性相同。分子量为24kD,最适pH为7-10。除了具有传统天然胰酶所具有的消化切割肽链的功能外(细胞间的蛋白消化),由于其非源于猪、牛或羊的胰脏,所以产品不含任何动物来源组分。也由于重组蛋白生产的产物单一性特点,产物中除了胰蛋白酶外,没有传统天然胰酶中不可避免的糜蛋白酶等组分。另外,特有的对重组蛋白甲基化修饰的非专利保密生产工艺设计,使得重组蛋白的温度稳定性大为提高,产品可以稳定的保存在2-8度环境中。不再需要-20度保存。

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