流感病毒分离无血清培养基

简要描述:
流感病毒分离无血清培养基用于接种流感病毒后,维持MDCK细胞的生长。

产品描述

流感病毒分离无血清培养基

【流感病毒分离无血清培养基   用途与描述】

在使用MDCK细胞培养分离流感病毒的操作中,流感病毒分离无血清培养基用于接种流感病毒后,维持MDCK细胞生长。

 特别说明:
1. 该产品在使用前需要添加终浓度为2ug/ml的TPCK-胰酶和双抗(青霉素终浓度100U/ml;链霉素100ug/ml)。
2. 在流感病毒分离中,需配套使用MDCK细胞无血清培养基(NC0201),方能在24h小时内观察到细胞病变和分离到流感病毒。

【流感病毒分离无血清培养基   规格与保存】

产品货号
产品名称
产品规格
保存条件
有限期限
NC0204流感病毒分离无血清培养基500mL/瓶2-8℃保存12个月

【流感病毒分离无血清培养基   主要成分】

 在基础培养基之上,添加了一些适合维持MDCK细胞生长和流感病毒快速复制需要的组分,以达到快速分离出流感病毒。

【流感病毒分离无血清培养基   使用方法】

    流感病毒的分离与培养

1) 选取融合度90%-100%且处于对数生长期的MDCK细胞,弃去培养液,用PBS或不含钙镁的Hank’s液清洗细胞2-3遍。

2)加入200 μL的流感病毒样本,温和摇动数次。

3)置于37℃,5% CO 培养箱中吸附1-2小时。

4)吸出接种物,加入6 mL流感病毒分离无血清培养基(使用前需要添加抗生素及终浓度为2ug/mL的TPCK-胰酶)于培养瓶中,
放置于33℃-35℃,5%CO2 培养箱中培养,每日观察病变。

5)当75%-100%的细胞出现病变时即可准备收获病毒。

6)温和摇动细胞瓶2-3次。将培养瓶中的病毒液置于15mL离心管中。

7)为了提高病毒滴度,可将离心管置于-70度冰箱或液氮上方反复冻融一到两次。

8)收获的病毒液可立即进行血凝试验,或负80度冰箱冷冻长期保存。

流感病毒分离操作流程.jpg

【MDCK细胞培养操作视频】

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点击“客户服务”>“实验视频”,根据提示操作即可观看哦~~~乐山生物微信公众号.png

乐山版《MDCK细胞复苏》
乐山版《MDCK细胞传代》
乐山版《MDCK细胞接毒》
乐山版《MDCK细胞冻存》

【MDCK细胞接种病毒后的细胞状态】

接种流感病毒后,无血清培养基对MDCK细胞维持能力强。

病毒接种24hMDCK细胞状态.jpg未接种病毒,MDCK细胞状态.jpg病毒接种48hMDCK细胞状态.jpg未接种病毒MDCK细胞状态.jpg

病毒接种24h时
MDCK细胞状态

未接种病毒,
24h时MDCK细胞状态

病毒接种48h时
MDCK细胞状态图片

未接种病毒,
48h时MDCK细胞状态

客户问答

1、 如何获得更高的病毒滴度?

答:1)用MDCK细胞无血清培养基培养的细胞分离流感病毒时,需要使接种病毒前的细胞融合度达到90%及以上(融合度要比用DMEM+10%FBS培养的细胞高)。
2)收获病毒后,将含有病毒液的离心管置于-70度冰箱或液氮上方反复冻融一到两次。
您可扫描乐山生物微信公众号,根据提示观看《MDCK细胞接毒》实验视频。

2、 流感病毒分离无血清培养基中含抗生素吗?

答:流感病毒分离无血清培养基中未添加抗生素,使用前需添加终浓度为2ug/ml的TPCK-胰酶和青链霉素溶液(青霉素终浓度为100U/mL,链霉素终浓度为100μg/mL)

3、 还需要向流感病毒分离无血清培养基中添加BSA吗?

答:无需添加BSA,使用前只需要向流感病毒分离无血清培养基中添加终浓度为2ug/ml的TPCK-胰酶和青链霉素溶液(青霉素终浓度为100U/mL,链霉素终浓度为100μg/mL)即可。

4、 需要向流感病毒分离无血清培养基中添加L-谷氨酰胺吗?需要调节pH值吗?

答:流感病毒分离无血清培养基开瓶即能使用,不需要添加L-谷氨酰胺和调节pH值。

使用说明

暂无使用说明下载

背景知识

2015年8月1日,乐山生物流感病毒分离液产品正式上市销售。该产品为2015年4月1日先期上市销售的MDCK无血清培养基产品的配套使用产品。最大的创新点在于,它可以在24小时内分离到流感病毒。而传统的方式需要72小时。

流感病毒分离液,简单说来,用途为分离出侵染入MDCK细胞并在内部进行大规模复制的流感病毒。具体来说,就是提供一个适宜的环境,足够让MDCK细胞在其中维持但不又不能增殖,以使病毒采样管中采集到的流感病毒可以高效的侵染进入MDCK细胞内部,在内部进行病毒复制。

该产品主要应用与各级疾控中心流感病毒分离工作中,在使用中需要与MDCK无血清培养基(NC0201)与病毒采样管(MT0301)配套使用:病毒采样管(MT0301),用于采集流感病毒的样本并保护运输至实验室;MDCK无血清培养,培养MDCK细胞,以用于后续的病毒复制使用;无血清流感病毒分离液,分离到流感病毒。

流感病毒分离无血清产品与MDCK无血清培养基产品结合起来使用,可以在24小时分离到流感病毒。而现在普遍使用的DMEM+10%组合传统流感病毒分离液使用,最快72小时方可分离到流感病毒。他的意义在于能够将特定流感病症的确诊时间提前48小时。这对各级疾控中心来讲,是流感监测工作的巨大进行。因为,时间就是生命!

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